單增李斯特菌檢測(cè)試劑盒（熒光PCR法）

說(shuō) 明 書

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：?jiǎn)卧隼钏固鼐鷻z測(cè)試劑盒（熒光PCR法）

【貨號(hào)】

BD-Ⅰ-303

【包裝規(guī)格】

50Tests/kit

【預(yù)期用途】

本品主要用于單增李斯特菌檢測(cè)鑒定及突發(fā)公共衛(wèi)生事件的處置，還可用于單增李斯特菌的環(huán)境監(jiān)測(cè)、衛(wèi)生檢疫及感染的輔助診斷。僅供研究、不用于臨床診斷！

【檢測(cè)原理】

    本試劑盒采用聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)及TaqMan熒光探針技術(shù),在單增李斯特菌基因序列的高度保守區(qū)域設(shè)計(jì)引物及熒光探針，通過(guò)全自動(dòng)熒光PCR儀對(duì)疑似單增李斯特菌感染患者標(biāo)本中的單增李斯特菌進(jìn)行擴(kuò)增檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)單增李斯特菌的定性檢測(cè)。

【試劑盒組成】

【儲(chǔ)存條件及有效期】

-20℃避光貯存，避免反復(fù)凍融。有效期12個(gè)月（請(qǐng)于有效期內(nèi)使用）。

【適用儀器】

ABI PRISM®7900、ABI PRISM®7500、ABI PRISM®7300、ABI PRISM®7700、ABI PRISM®7000、MJ Opticon 、BIORAD iCycler 、Roch  LightCycler^TM、Qiagen Rotor Gene等。

【樣本要求】

樣本采集后應(yīng)及時(shí)檢測(cè)，否則應(yīng)-20℃保存，避免反復(fù)凍融，使用干冰或液氮運(yùn)輸。

【檢驗(yàn)方法】

    1.試劑準(zhǔn)備（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

2.樣本處理（樣本處理區(qū)）

2.1取200μl的待檢樣本及陰性對(duì)照樣本進(jìn)行核酸提取。DNA可采用Trizol法、硅膠膜吸附法、磁珠法等微量DNA提取試劑盒提取，按相應(yīng)說(shuō)明書要求進(jìn)行操作。提取好的DNA應(yīng)及時(shí)用于檢測(cè)，否則應(yīng) – 20℃保存。

2.2加樣：在準(zhǔn)備好試劑的PCR反應(yīng)管中分別加入陰、陽(yáng)性質(zhì)控品、待測(cè)樣本DNA各5μl，蓋緊管蓋后，瞬時(shí)低速離心。

3.PCR擴(kuò)增檢測(cè)（擴(kuò)增區(qū)）

待檢PCR管轉(zhuǎn)移至擴(kuò)增區(qū)，按順序置于PCR儀上，編輯樣本信息，設(shè)定循環(huán)參數(shù)（請(qǐng)參照各類儀器的操作說(shuō)明進(jìn)行設(shè)置）。

*注：ABI系列熒光PCR儀不選ROX校正，淬滅基團(tuán)選擇None。

4.結(jié)果分析

ABI7500熒光PCR儀:將 baseline設(shè)為3-15(根據(jù)實(shí)際情況，baseline cycler可在一定范圍內(nèi)變化),熒光閾值（threshold）設(shè)定原則以閾值線剛好超過(guò)陰性對(duì)照品擴(kuò)增曲線（無(wú)規(guī)則的噪音線）的zui高點(diǎn)，且Ct值=40（或顯示為undet）。使用儀器配套軟件自動(dòng)分析結(jié)果。

5.質(zhì)量控制

試劑盒中提供陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性對(duì)照各一個(gè)，對(duì)應(yīng)Ct值分別為Ct陽(yáng)、Ct陰；如試劑質(zhì)量完好并操作正確，Ct陽(yáng)< Ct陰，Ct陽(yáng)<30，并呈現(xiàn)典型的S型擴(kuò)增曲線，否則實(shí)驗(yàn)無(wú)效，應(yīng)檢查儀器、試劑、擴(kuò)增條件等方面的誤差。在每次檢測(cè)中應(yīng)設(shè)置陰陽(yáng)性對(duì)照品。

6．實(shí)驗(yàn)結(jié)果的判定

在實(shí)驗(yàn)有效的前提下

【實(shí)驗(yàn)結(jié)果的解釋】

1. 在所有對(duì)照都滿足要求的前提下，在35個(gè)循環(huán)之前，所有的臨床樣本的反應(yīng)擴(kuò)增曲線都應(yīng)該超過(guò)閾值線，這表明擴(kuò)增到足夠量的RNA，也表明了樣本質(zhì)量合格。然而，可能有些樣本會(huì)由于初始臨床樣本中的病毒數(shù)量較少而無(wú)法出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果。
2. 在38個(gè)循環(huán)之內(nèi)，陰性質(zhì)控品和試劑空白（NTC）熒光增長(zhǎng)曲線不應(yīng)該超過(guò)閾值線。如果任何其中任何一個(gè)的增長(zhǎng)曲線超過(guò)了閾值線，（1）可能DNA提取試劑污染，在實(shí)驗(yàn)前應(yīng)確保RNA提取試劑無(wú)誤。（2）DNA提取過(guò)程或建立反應(yīng)加樣過(guò)程發(fā)生交叉污染。應(yīng)嚴(yán)格遵照操作程序的要求進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)。
3. 在30個(gè)循環(huán)之前，陽(yáng)性質(zhì)控品應(yīng)出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果。如果沒(méi)產(chǎn)生預(yù)期的陽(yáng)性結(jié)果則視為無(wú)效，應(yīng)嚴(yán)格遵照操作程序進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)。

【參考值范圍】

1.Ct值≥38（或顯示為undet），陰性結(jié)果

2.Ct值<35，陽(yáng)性結(jié)果

【檢測(cè)方法的局限性】

1.樣本在收集、處理、運(yùn)輸以及保存不當(dāng)時(shí)，可能出現(xiàn)假陰性或假陽(yáng)性結(jié)果。

2.如果反應(yīng)中存在抑制物和過(guò)量的DNA、RNA模板時(shí)也可能出現(xiàn)假陰性。

3.實(shí)驗(yàn)操作的任何失誤都有可能導(dǎo)致無(wú)意義的檢測(cè)結(jié)果。

【產(chǎn)品的性能指標(biāo)】

本試劑盒能檢測(cè)出相當(dāng)于10³copies/ml的單增李斯特菌DNA；與非單增李斯特菌無(wú)交叉反應(yīng)。

【試劑盒使用注意事項(xiàng)】

本試劑盒為體外檢測(cè)試劑。操作人員應(yīng)經(jīng)過(guò)專業(yè)培訓(xùn)并具有一定經(jīng)驗(yàn)。

為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性請(qǐng)使用已校準(zhǔn)的移液器，選用進(jìn)口一次性使用的PCR反應(yīng)管、離心管、tip頭等進(jìn)行樣本處理及配液等操作，所有用具應(yīng)不含DNA酶和RNA酶。

實(shí)驗(yàn)應(yīng)嚴(yán)格分區(qū)操作；各區(qū)物品,工作服均為,不得交叉使用。實(shí)驗(yàn)后應(yīng)及時(shí)清潔工作臺(tái)以防污染。

本產(chǎn)品使用前應(yīng)在室溫充分融化，混勻并瞬時(shí)低速離心。

標(biāo)本處理應(yīng)在生物安全柜中進(jìn)行，以保護(hù)操作人員安全和防止對(duì)環(huán)境的污染。

每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)設(shè)置陰陽(yáng)性對(duì)照品。不同批號(hào)的試劑請(qǐng)勿混用，在有效期內(nèi)使用試劑盒。

實(shí)驗(yàn)樣品盡可能新鮮，提取過(guò)程應(yīng)嚴(yán)防RNA酶污染及操作不當(dāng)導(dǎo)致的RNA降解。

在-20℃保存的DNA樣本，加樣前應(yīng)在室溫充分融化、混勻并瞬時(shí)低速離心后使用。

分裝有反應(yīng)液的反應(yīng)管應(yīng)扣蓋或裝入密實(shí)袋內(nèi)再轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。

加樣時(shí)應(yīng)使樣品*落入反應(yīng)液中，不應(yīng)有樣品粘附于管壁上，加樣后應(yīng)盡快蓋緊管蓋。

反應(yīng)液分裝時(shí)盡量避免產(chǎn)生氣泡，上機(jī)前注意檢查各反應(yīng)管是否蓋緊，以免物質(zhì)泄露污染儀器。

擴(kuò)增完畢取出反應(yīng)管，密封在塑料袋內(nèi)，丟棄于地點(diǎn)。

實(shí)驗(yàn)中用過(guò)的吸頭請(qǐng)直接打入盛有10%次氯酸鈉的廢物缸內(nèi)，并與其他廢棄物品一同滅菌后丟棄。

工作臺(tái)及各種實(shí)驗(yàn)用物品經(jīng)常用10%次氯酸鈉、75%酒精和紫外燈進(jìn)行消毒。

實(shí)時(shí)熒光PCR儀器使用前預(yù)熱30分鐘，連續(xù)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，儀器間隔一小時(shí)以上再使用。

實(shí)時(shí)熒光PCR儀需經(jīng)常校正和清潔載樣板板孔。

本試劑盒涉及的檢測(cè)樣本應(yīng)視為具有傳染性物質(zhì)，操作和處理均需符合衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則》和《醫(yī)療廢物管理?xiàng)l例》相關(guān)要求。

本司還提供以下試劑盒

JL2107820 寨卡病毒通用型核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/span>

JL210784 登革熱病毒通用型核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/span> 兩種規(guī)格： 24T /48T /盒

JL210785 登革病毒Ⅰ型核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/span>

JL210786登革病毒Ⅱ型核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/span>

JL210787 登革病毒Ⅲ型核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/span>

JL210788登革病毒Ⅳ型核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/span>

JL210789登革病毒Ⅰ型/Ⅲ型雙通道核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/span>  

JL210790登革病毒Ⅱ型/Ⅳ型雙通道核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/span>

JL210810基孔肯雅病毒核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/span>

JL210811黃熱病病毒核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/span>

JL210812西尼羅病毒核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/span>   

JL210813登革病毒/基孔肯雅病毒雙通道核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/span>  

JL210814黃熱病毒/西尼羅河病毒雙通道核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/span>  

JL210815乙型腦炎病毒核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/span>

JL210816森林腦炎病毒核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/span>

JL210817無(wú)形體屬核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/span>

JL210818發(fā)熱伴血小板減少綜合癥布尼亞病毒核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/span>

JL210819裂谷熱病毒核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/span>   

JL210112埃博拉病毒（扎伊爾型）核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/span>   

JL210113馬爾堡病毒核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/span>

JL210114 NDM-1基因核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/span>

JL210115 腦膜炎雙球菌核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/span>

JL210116 尼帕病毒核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/span>

JL210122腎綜合征漢灘病毒核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/span>

JL210123腎綜合征漢城病毒核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/span>

JL210124腎綜合征漢灘/漢城病毒核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/span>

JL210125肺綜合癥漢坦病毒核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/span>

JL210127血吸蟲核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/span>

JL210128瘧原蟲核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/span>

JL210129肝吸蟲核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/span>

JL210130鼠疫耶爾森菌核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/span>

JL210131炭疽桿菌核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/span>

JL210132布魯氏桿菌核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/span>

JL210133布魯氏桿菌Abortus/Melitensis/ovis分型核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/span>

JL210134轉(zhuǎn)基因大豆核酸檢測(cè)試劑盒（PCR－熒光探針?lè)ǎ?/span>

JL210135沃爾巴克氏體wpip型核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/span>

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