1 、前言說(shuō)明

星狀病毒*次被闡述是在1975年，并根據(jù)其在電子顯微鏡下的星型形狀而被定義為星狀病毒。星狀病毒屬于星狀病毒科，人星狀病毒可以分為7種血清型。星狀病毒、輪狀病毒和星狀腺病毒是引起5歲以下兒童非細(xì)菌性腸胃炎zui常見(jiàn)的病因。因此80%以上的5歲至10歲的兒童都是抗星狀病毒抗體陽(yáng)性個(gè)體。人們同時(shí)也發(fā)現(xiàn)星狀病毒也會(huì)引起成年人患腸胃炎和腸胃炎引起的院內(nèi)感染。疾病的過(guò)程通常都是自我調(diào)節(jié)的過(guò)程，并且持續(xù)時(shí)間相對(duì)較短。病毒潛伏一到兩天后，持續(xù)一到四天的腸胃炎一般會(huì)伴隨嘔吐、腹瀉、發(fā)燒和腹痛，zui后并引起脫水。從長(zhǎng)年來(lái)看，星狀病毒感染主要發(fā)生在冬季。人與人之間星狀病毒的感染主要通過(guò)排泄物-口腔傳播，或通過(guò)感染的食物來(lái)傳播。感染的病人通過(guò)其糞便排泄出大量星狀病毒粒子。我們可以通過(guò)電子顯微鏡或分子生物學(xué)的方法（如PCR技術(shù)）來(lái)檢測(cè)星狀病毒粒子。同時(shí)免疫學(xué)方法如酶免也是常規(guī)實(shí)驗(yàn)室診斷一種常用方法，因?yàn)槊该夥椒臁⒔?jīng)濟(jì)并且可以自動(dòng)操作。

2 、應(yīng)用范圍

健侖公司的星狀病毒抗原ELISA試劑盒可用于糞便樣品中星狀病毒的體外檢測(cè)。在美國(guó)，此試劑盒僅供研究應(yīng)用。

3 、實(shí)驗(yàn)原理

健侖公司的星狀病毒抗原ELISA試劑盒是一種一步法的免疫檢測(cè)試劑盒，整個(gè)盒子采用了一種多克隆抗體和一種單克隆抗體。將稀釋好的糞便樣品和HRP標(biāo)記的單克隆抗星狀病毒抗體加入到多克隆抗星狀病毒抗體包被的微孔中。室溫下溫育60分鐘后，洗板除去未結(jié)合的成分。之后加入可顯色的TMB底物液，室溫下10分鐘后產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物。加入硫酸終止酶反應(yīng)，此時(shí)溶液顏色又藍(lán)色變成黃色。zui后在450/620nm處讀取OD值，樣品中星狀病毒的量OD值成正比。

4 、試劑盒成分

5 、試劑的準(zhǔn)備和儲(chǔ)存

5.1試劑盒的大小和有效期

一個(gè)盒子可用來(lái)檢測(cè)96人份。

每種成分的有效期都顯示在其相應(yīng)的標(biāo)簽上，試劑盒的有效期標(biāo)記在其試劑盒的外標(biāo)簽上。

根據(jù)要求，所的試劑盒成分必須保存在2-8℃的環(huán)境下，是能儲(chǔ)存在其原始試劑盒中。試劑盒打開(kāi)后，所有的試劑盒成分在適當(dāng)?shù)沫h(huán)境下可穩(wěn)定儲(chǔ)存2個(gè)月。

5.2試劑的準(zhǔn)備

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前將所有的試劑盒成分都平衡至室溫。

包被板密封在含干燥劑的真空試劑袋中，包被板可拆。在打開(kāi)試劑袋前將密封的包被板平衡到室溫。不用的微孔應(yīng)當(dāng)重新密封并冷藏，避免受潮。

用蒸餾水或去離子水將濃縮的洗滌液稀釋10倍，準(zhǔn)備足夠用量的洗滌液。

例如：10ml的濃縮洗滌液+90ml蒸餾水

即用型的洗滌液可在2-8℃下穩(wěn)定存放30天。

確保每次洗板時(shí)，洗滌液在微孔中zui少浸泡5秒鐘，并在每次洗板后將微孔內(nèi)的剩余液體拍干。TMB底物液避免太陽(yáng)直射。

6 、實(shí)驗(yàn)步驟

用樣品稀釋液按1：10的比例稀釋樣品，例如：100mg或者100ul糞便樣品+1.0ml樣品稀釋液。試劑和樣品分配時(shí)避免時(shí)間誤差。

6.1操作步驟

1）  在使用前將所有的試劑都平衡到室溫，混合試劑時(shí)避免氣泡。

2）  在相應(yīng)的微孔中分別加入2滴（或75ul）HRP酶聯(lián)物和2滴（或75ul）陽(yáng)性質(zhì)控、陰性質(zhì)控和50ul已稀釋好的樣品，混合均勻。

3）  蓋板，室溫下溫育60分鐘。

4）  棄去孔內(nèi)反應(yīng)液，每孔用300ul洗滌液洗板5次，zui后在吸水紙上拍干。

5）  在每一微孔中加入2滴（或75ul）TMB底物液。

6）  室溫下避光溫育10分鐘

7）  在每一微孔中加入2滴（或75ul）終止液，混合均勻。

8）  加終止液后30分鐘內(nèi)450nm處讀取OD值（參考波長(zhǎng)620或690nm）。

7 、結(jié)果說(shuō)明

定性評(píng)價(jià)

臨界值的確定：陰性質(zhì)控的OD+0.1

樣品OD值等于或高于臨界質(zhì)控的樣品被認(rèn)為是陽(yáng)性樣品，樣品OD值低于臨界質(zhì)控的樣品被認(rèn)為是陰性樣品。

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