美國BinaxNOW 肺炎鏈球菌抗原檢測試劑盒說明書

廣州健侖生物科技有限公司

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【產品名稱】

通用名稱：肺炎鏈球菌抗原檢測試劑盒（膠體金法）

商品名稱：Binax NOW^® Streptococcus pneumoniae Test

【包裝規格】

22人份/盒。

【預期用途】

肺炎鏈球菌抗原檢測試劑盒（膠體金法）是一種體外快速免疫層析(ICT)試驗，用于檢測肺炎病人尿液和腦膜炎病人腦脊液（CSF）中的肺炎鏈球菌抗原，與培養等其他方法結合，用于肺炎球菌性肺炎和肺炎球菌性腦膜炎的輔助診斷。

肺炎鏈球菌是社區獲得性肺炎的主因，并且可能是不明原因社區獲得性肺炎的重要致病原^{1, 2}。肺炎球菌性肺炎的病死率高達30%，這取決于菌血癥、年齡和潛在性疾病^{1, 3}。如果未得到正確診斷和治療，肺炎鏈球菌感染可導致菌血癥、腦膜炎、心包炎、膿胸、暴發性紫癜、心內膜炎和/或關節炎^{4, 5}。

肺炎球菌性腦膜炎常導致不可逆轉的腦損傷或腦死亡，它既可作為其他肺炎球菌感染的并發癥出現，也可單獨出現⁶。各個年齡段人群均可感染，但更常見于5歲以下兒童、青少年和老年人⁷。病程進展快速，數小時內可從輕度疾病轉為昏迷，這就使得即刻做出診斷，立即動用抗菌素進行治療顯得尤為重要。盡管采用了適當的抗生素治療幾天后還是會有20%-30%的肺炎球菌性腦膜炎病人會死掉⁶。病死率在小兒和高齡病人中甚至更高⁶。

Binax NOW^®肺炎鏈球菌抗原檢測試劑盒（膠體金法）為肺炎球菌性肺炎的診斷提供了一種簡便快速的診斷方法，該方法所用檢測樣品為尿液，尿液的收集、貯存和運輸都非常方便，該實驗通過對腦脊液進行檢測也可對肺炎球菌性腦膜炎做出及時高度準確的診斷。

【檢驗原理】

肺炎鏈球菌抗原檢測試劑盒（膠體金法）是一種薄膜免疫層析試驗，用于檢測人類尿液和腦脊液中肺炎球菌的可溶性抗原。兔抗肺炎鏈球菌抗體被吸附到硝酸纖維素膜上作為樣本線，對照抗體作為另一條線吸附到同一膜上。結合有可視粒子的兔抗肺炎鏈球菌抗體和抗種抗體干燥結合到惰性纖維支持物上，形成的結合物墊和帶條紋的膜結合到一起組成檢測條。檢測條和放拭子標本的孔位于一個書形鉸鏈狀檢測卡的兩側。

試驗時，將拭子浸入標本中（尿液或腦脊液），取出，然后插入檢測卡中，從滴瓶中加入A試劑（一種緩沖液），將檢測卡閉合，使樣本和檢測條相觸。樣本中存在的肺炎球菌抗原與抗肺炎鏈球菌抗體結合物結合，形成的抗原結合物復合物被固定的抗肺炎鏈球菌抗體捕獲，形成樣本線。固定的對照抗體捕獲種屬抗體結合物，形成對照線。

試驗結果可通過紫紅色線的出現與否來解釋。陽性結果（取決于標本中存在的抗原濃度）在15分鐘讀數時，會檢測出樣本線和對照線。陰性結果，15分鐘讀數時只出現對照線，表示標本中未檢測到肺炎鏈球菌抗原。如果對照線未出現，不管標本線出現與否，都視為無效結果。

【主要組成成分】

① 檢測卡       包被有純化的兔抗肺炎鏈球菌C-多糖抗體、用專門方法結合到抗肺炎鏈球菌抗體上的膠體金粒子、雞IgY、用專門方法結合到驢抗雞抗體上的膠體金粒子

② A試劑        枸椽酸鹽/帶有十二烷基磺酸鈉的磷酸鹽緩沖液，吐溫^®20，疊氮鈉。

③ 樣本拭子     于Binax NOW^®肺炎鏈球菌抗原檢測試劑盒（膠體金法）(不接觸人體，用于蘸取已經采集好的尿液或腦脊液)。不要使用其他拭子。

④ 陽性對照拭子  加熱滅活的肺炎鏈球菌抗原干燥結合到拭子上

⑤ 陰性對照拭子  肺炎鏈球菌陰性拭子

【儲存條件及有效期】

試劑盒儲存于2-30℃，有效期為24個月。

【樣本要求】

在做Binax NOW^®肺炎鏈球菌抗原檢測試劑盒（膠體金法）前，將所有標本平衡至室溫（15-30℃）。測試前，要將標本輕輕旋勻。

尿液（用于肺炎診斷）

將尿液收集在標準容器中。收集后，如果24小時內測定，室溫保存（15-30℃）。此外，將尿液在2-8℃保存或冷凍保存，可存放14天。硼酸可用作防腐劑。

必要時，可將尿液標本用防漏容器在2-8℃或冷凍條件下運送。

腦脊液（用于腦膜炎診斷）

根據標準程序收集腦脊液，測試前腦脊液在室溫（15-30℃）只能貯存24小時。冷藏（2-8℃）或冷凍（-20℃）可貯存至1周。

【檢驗方法】

檢測肺炎球菌肺炎時用尿液標本，檢測肺炎球菌性腦膜炎時用腦脊液標本。

注：測試液性標本時用3滴A試劑。

• 將病人標本和/或液狀對照品放至室溫（15-30℃），輕輕混勻。測試前從包裝袋中取出檢測卡平放。

• 將1根Binax樣本拭子浸入要測試的標本中，*浸沒拭子頭。如果拭子有滴水，將拭子靠在收集容器的邊上，排去多余的液體。

• 檢測卡內部的右手邊有兩個孔，將拭子插入底部的孔中（拭子孔），穩步向前推，使整個拭子頭在上部的孔中可見，不要取出拭子。

• 垂直持放A試劑瓶，高出檢測卡上方1/2到1英寸，慢慢向底部的孔中加入3滴A試劑。

• 立即從檢測卡的右緣揭去粘附襯，封閉檢測卡，過15分鐘在窗口判讀結果。15分鐘后讀取的結果可能不準確。然而，有些陽性病人不到15分鐘就出現可見樣品線。

注意：只能使用本試劑盒提供的樣本拭子，不要使用其它拭子。為方便起見，在拭子柄上做了切痕，在閉合檢測卡時可能會將拭子柄折斷。操作時不要使拭子柄從孔中脫出。

質量控制

日常質量控制：

Binax NOW^®肺炎鏈球菌抗原檢測試劑盒（膠體金法）中含有陽性和陰性過程對照品。作為日常質量控制，制造商的低要求是：每天的第1份樣本都要記錄過程對照結果。

陽性過程對照

對照位置的紫紅色線可被看作是內部陽性過程對照，如果毛細管流動暢通，檢測卡功能完整，這條線始終會出現。

陰性過程對照

結果窗口的清晰背景色是陰性背景對照。窗口的背景色在15分鐘內應當是淡紫紅色到白色，不應干擾結果的判讀。

外在陰陽性對照：

良好試驗室操作規范建議用陰陽性對照來保證試劑的功效和操作正確。監測整個反應的陰性拭子和陽性拭子試劑盒中都有提供，應當用對照拭子測定程序測定。每打開一個試劑盒都要做拭子對照，這也是你所在實驗室的標準質量控制程序要求的。其他對照可根據地方、州和/或聯邦法規或鑒定組織的要求進行。

如果沒有獲得預期對照結果，請不要報告病人結果。檢查操作步驟，重做對照測試或與Inverness Medical聯系。

對照拭子程序

Binax NOW^®拭子對照

注意：對照拭子用6滴A試劑

• 用前將檢測卡從包裝袋中取出，平放。
• 在檢測卡的右手邊有2個孔，將拭子插入底部的孔中，平穩向前推使拭子頭在上部的孔中*可見，不要取出拭子。
• 垂直持A試劑瓶，高于檢測卡1/2到1英寸，慢慢加入6滴A試劑到底部的孔中。
• 立即從檢測卡的右緣揭去粘附襯，封閉檢測卡，15分鐘時在窗口中讀取結果。超過15分鐘讀取的結果可能不準確。然而，陽性對照拭子樣本線15分鐘內就可能看到。

【檢驗結果的解釋】

陰性標本：在窗口的上半部分將出現一條紫紅色對照線，表示結果陰性。對照線表示試驗的檢測過程是正確的，只是未檢測到肺炎鏈球菌抗原。

陽性標本：將出現兩條紫紅色線，表示檢測到抗原。抗原水平低的標本可能出現一條暗淡的線。任何可見線都表示陽性。

無效結果：如果沒有線條出現，或僅出現樣本線，測定是無效的。

【檢驗方法的局限性】

Binax NOW^®肺炎鏈球菌抗原檢測試劑盒（膠體金法）僅用尿液和腦脊液標本驗證過，其他可能含有肺炎鏈球菌抗原的標本（例如血漿或其他體液）尚未進行過評價。

Binax NOW^®試驗陰性不能排除肺炎鏈球菌感染，因此，該項結果，還有培養結果，血清學或其他抗原檢測方法學應當結合臨床結果作出準確診斷。

未對服用抗生素超過24小時的病人或新近完成一個抗菌治療的病人用Binax NOW^®肺炎鏈球菌抗原檢測試劑盒（膠體金法）進行過評價，也未對非處方藥對肺炎球菌性腦膜炎病人的影響進行確定。

使用肺炎鏈球菌疫苗后48小時內可能對尿液中 Binax NOW^®肺炎鏈球菌抗原檢測試劑盒（膠體金法）造成假陽性結果。疫苗對肺炎球菌腦膜炎患者的影響未做確定。因此，建議使用肺炎鏈球菌疫苗后5天內不要進行Binax NOW^®肺炎鏈球菌檢測。

Binax NOW^®試驗對小兒尿液的準確性還未得到證實，另一方面，對小兒腦脊液的性能已得到了證實（見腦脊液-性能數據）。

【產品性能指標】

性能數據-尿液

分析敏感性

血清型評估

代表23個肺炎鏈球菌血清型的44株分離菌株引起了美國乃至*90%以上肺炎球菌感染。他們都在培養基上生長且在10⁵細胞/ml時Binax NOW^®試驗陽性。

檢測限

NOW^®試驗的檢測限（LOD）定義為95%的次數出現陽性結果的陽性尿液的稀釋度，是通過將已知病人陽性尿液標本做多倍稀釋并用NOW^®試驗進行檢測而確定的。

每個稀釋度共做100-200次測定，5個操作者對每個稀釋度的20-40個檢測卡進行解釋。下列結果把1:250稀釋度作為NOW^®試驗的檢測限。

臨床敏感性和特異性（回顧性研究）

作為回顧性研究的一部分，在3家機構中，收集了35份血培養陽性肺炎球菌肺炎病人和338份血培養陰性肺炎球菌肺炎病人的尿標本（共373個病人），用Binax NOW^®試驗進行評估。 用標準方法推算Binax NOW^®試驗性能。敏感性是86%，特異性為94%，總準確度是93%，95%可信區間如下所示。

血   培養

+     —

NOW®  +                                         

結果    —                            

敏感性=86%     （71%-94%）

特異性=94%     （91%-96%）

準確度=93%     （90%-95%）

臨床敏感性和特異性（前瞻性研究）

分別在7個中心進行的前瞻性研究中，從有下呼吸道癥狀或膿毒癥的住院和門診病人以及其他可疑肺炎球菌肺炎病人中收集了215份尿標本，對Binax NOW^®試驗進行了評估。血培養陽性的病人被視為有肺炎球菌肺炎。

用Binax NOW^®試驗對住院病人和門診病人進行了同等測試。95%可信區間如下。

門診性能

血   培養

+     -

NOW®  +                                                                           

結果     -                           

敏感性=90%     （70%-97%）

特異性=78%     （70%-85%）

準確度=80%     （72%-86%）

住院病人性能

血   培養

+     -

NOW®  +                                         

結果     -                           

敏感性=90%     （60%-98%）

特異性=71%     （59%-80%）

準確度=73%     （62%-82%）

交叉反應性

尿液檢測

在上面的回顧性研究中，從338位陰性病人中分離出270種微生物。165種分離自尿道感染病人的微生物中，15種（9%）產生了陽性結果：2/2陰溝腸桿菌，1/2金黃色葡萄球菌，1/1鏈球菌（非A非B群），1/1鏈球菌（非D群），1/17鏈球菌（D群），1/3斯氏普羅威登斯菌，5/78大腸埃希氏菌，3例未鑒定菌。從肺炎病人分離出的59株細菌中，3株（5%）是陽性的，包括1/3堪薩斯分枝桿菌和2/15結核分枝桿菌。從菌血癥病人分離的41例微生物中1例（2%）奇異變形桿菌產生的結果是陽性的。與5例膿胸分離菌無交叉反應性。后，從不明原因感染病人收集的尿標本中4/100是陽性的。

由于本研究是回顧性的，進行測試的各種感染病人的數量是有限的，且各人的病史不祥，因此，不能排除存在肺炎鏈球菌混合感染的情況。當用純培養進行測試時（資料如下），這些微生物在NOW^®試驗中均未產生交叉反應性。

全微生物檢測

為了確定Binax NOW^®試驗的分析特異性，收集了144份交叉反應物，包括與肺炎有關的微生物和那些可能作為正常菌群在泌尿生殖道發現的微生物，以及引起尿道感染的微生物。所有微生物都在10⁶到10⁹CFU/ml用Binax NOW^®試驗進行了評估，在144例微生物中有143例無交叉反應性，只有陽性的微生物是緩和鏈球菌，由于它和Binax NOW^®試驗有共同抗原，交叉反應是可預期的。緩和鏈球菌與心內膜炎有關，而非肺炎，不可能頻繁出現在NOW^®試驗測試人群中⁸。下列生物經過測試且結果為陰性。當檢測出不止一株時，用數字列在括號內。

不動桿菌（4）莢膜組織胞漿菌*（2）普通變形桿菌（2）

腺病毒*產酸克雷白菌 （2）斯氏普羅威登斯菌 糞產堿桿菌

肺炎克雷白菌（3）假單胞菌屬 （7）乳酸桿菌 （5）

呼吸道合胞病毒* 皮炎芽生菌*  嗜肺軍團菌 鼻病毒*

百日咳鮑特菌  產單核細胞李斯特菌  沙門菌 （4）卡他布蘭漢菌

Luteus細球菌 (2)黏質沙雷氏菌 白色假絲酵母菌 (3)奧斯陸莫拉菌

鞘胺醇桿菌屬 multivorum 星形假絲酵母菌 摩根菌 金黃色葡萄球菌

厭氧球孢子菌* 堪薩斯分枝桿菌 葡萄球菌 (8)棒狀桿菌屬 (3)

結核分枝桿菌  寡養單胞菌屬 陰溝腸桿菌 (4)

支原體* (3)咽頰鏈球菌 ◊● avium腸球菌◊ 灰色奈瑟氏菌

牛鏈球菌 ◊ durans腸球菌◊ 淋病奈瑟氏菌

A群鏈球菌● 糞腸球菌 ◊ lactamica奈瑟氏菌 B群鏈球菌◊●

(8)大腸埃希氏菌 (8)腦膜炎奈瑟氏菌 C群鏈球菌◊●

Escherichia hemannii (2)多糖奈瑟菌  F群鏈球菌◊● 黃桿菌屬

(2)淺黃色奈瑟氏菌 G群鏈球菌◊●  陰道加德鈉氏菌  諾卡菌屬*

變異鏈球菌 ◊● 流感嗜血桿菌  (10)巴西副球孢子菌*

副血鏈球菌 ◊● 副流感病毒 *  (2)

血鏈球菌◊● 副流感暑血桿菌(2)

陰道毛滴蟲(2)

*來自CDC的純培養，據認定為高濃度。

◊非A非B鏈球菌(總株數是16)

●非D群鏈球菌(總株數是17)

干擾物質

用Binax NOW^®肺炎鏈球菌試驗對白細胞數（每低倍鏡視野的數量）、紅細胞數(每低倍鏡視野的數量)*、蛋白（500mg/dl）、糖（＞2000 mg/dl）、混濁度升高的尿液標本進行了評估，發現對試驗性能沒有造成影響。

*注：一份含有較多紅細胞的尿液由于檢測膜的過度顯色掩蓋了線條的出現產生了無效結果。

重復性研究

分別在3家床邊護理機構用一組含陰性、弱陽性、陽性、強陽性的單盲編碼標本對Binax NOW^®肺炎鏈球菌抗原檢測試劑盒（膠體金法）進行單盲研究。含有硼酸和不含硼酸的樣本都進行了測試。參與者在3天內對每一標本進行多次測試。359份測試標本中有357份（99.4％）產生了預期結果。

腦脊液性能資料

分析敏感性

檢測限

NOW^®試驗的檢測限（LOD）通過NOW^®試驗中多次測定肺炎鏈球菌稀釋液而確立。

對每個稀釋度做100次測定，由10個操作者對每個稀釋度的10個檢測卡進行解釋。下面的結果把5×10⁴細胞/ml作為 NOW®試驗的檢出限。

血清學評價

將在培養基上生長的與肺侵襲性疾病相關的常見的4個血清型（6，14，19，23）用腦脊液稀釋至5×10⁴細胞/ml，并用Binax NOW^®試驗測試。14個操作者每人對每個血清型的10個檢測卡結果進行解釋，共計解釋140個檢測卡，所有這4個血清型在檢測限（5×10⁴細胞/ml）100％被檢測了出來。

臨床敏感性和特異性

在一個多中心（4）的前瞻性研究中， 用Binax NOW^®試驗對590例有腦膜炎癥狀或打算做腰穿刺的住院和門診病人的腦脊液標本進行評估。腦脊液培養陽性的病人視為有肺炎球菌性腦膜炎。

用標準方法對 Binax NOW^®的試驗性能進行推算，特異性是99%（557/560），95%可信區間是98%-100%，敏感性是97%（29/30），95%可信區間是84%-100%。Binax NOW^®試驗未檢測出來的只有培養陽性標本據報道只產生了2個菌落。

腦脊液  培養

+       -

NOWR  +                                         

結果     -                            

敏感性=97%     （84%-100%）

特異性=99%     （98%-100%）

準確度=99%     （98%-100%）

交叉反應性

腦脊液檢測

在上面的前瞻性研究中，肺炎鏈球菌陰性腦脊液標本中的61份分離出了腸病毒或細菌，其中60份用 Binax NOWR試驗檢測陰性，，特異性是98%，只有陽性標本含有腸球菌。然而，另一份含腸球菌的腦脊液用Binax NOW^®試驗測試結果為陰性， 同全微生物培養結果一致（全微生物檢測參下）

全微生物檢測

除了在前瞻性研究中遇室的細菌和病毒感染， Binax搜集了一組潛在交叉反應物，包括常見的細菌性和病毒性腦膜炎致病因子，在 Binax NOW^®試驗中對濃度范圍從10⁷到10⁸CFU/ml的所有細菌進行了評估，對病毒在大于或等于10⁵I.U./ml水平進行了測試。 Binax NOW^®試驗顯示的特異性是100%，所有參加測試的病毒和細菌產生的結果均為陰性。

Burkitt^,s 淋巴瘤(Epstein Barr)     嗜血桿菌

柯薩奇A7病毒                非典型（35891）

柯薩奇B3病毒                單純皰疹病毒1型

埃可病毒、                   單純皰疹病毒2型

糞腸球菌                     產單核細胞李斯特菌（19115）

A群流感嗜血桿菌             產單核細胞李斯特菌（19424）

B群流感嗜血桿菌             腦膜炎奈瑟氏菌A血清型

C群流感嗜血桿菌           0  腦膜炎奈瑟氏菌B血清型

D群流感嗜血桿菌             腦膜炎奈瑟氏菌C血清型

E群流感嗜血桿菌             腦膜炎奈瑟氏菌D血清型

F群流感嗜血桿菌             腦膜炎奈瑟氏菌L血清型

流感嗜血桿菌                 口腔鏈球菌（35037）

非典型（51997）

干擾物質

有較高白細胞（1×10⁴細胞/ml），紅細胞（30細胞/μl）蛋白（3g/dl），膽紅素（100μg/ ml）的腦脊液標本用Binax NOW^®肺炎鏈球菌檢測試驗進行評價，未發現對試驗性能有影響。

重復性研究

分別在3家實驗室對一組包括陰性、弱陽性、陽性樣本的標本單盲編號，用 Binax NOW^®肺炎鏈球菌檢測試驗進行單盲研究。3天中對每一樣本進行多次測定。270份樣本100%得到了預期結果。

【注意事項】

對照拭子需要加6滴A液，病人標本需要加3滴A液。

• 無效結果，無對照線出現，A液加量不足時會出現。一定要加入足夠量液體，將小瓶垂直持于拭子孔上方1/2-1英寸處，慢慢滴加，使液體自由落下。
• 僅供體外診斷用。
• 檢測卡密封在包裝袋中，如果包裝破損或開封，請不要使用。用前從包中取出檢測卡，不要觸摸檢測卡的反應區。
• 不要使用過期試劑。
• 不要將不同批號試劑混合使用。
• 使用試劑盒中提供的拭子。不要使用其他拭子。
• 盡管制備對照拭子的溶液用標準方法進行了滅活，病人樣本、對照品和檢測卡仍應視為能傳播疾病的物質，遵照已建立的預防微生物危害的措施做適當處理。
• 此試驗所用尿液標本不要求必須是清潔的，因此，用于該試驗的標本可能不適于做細菌培養。
• 一旦拭子浸入腦脊液標本中，樣本不再是無菌的，可能不再適于做細菌培養。如果腦脊液標本要做培養，要么先做培養，要么將腦脊液標本分開。

【生產企業】

企業名稱：Binax, Inc.

生產地址：10 Southgate Road, Scarborough, ME 04074 

【中國地區總代理企業】

企業名稱：廣州健侖生物科技有限公司

地址：廣州清華科技園創新基地番禺石樓鎮創啟路63號二期2幢101-103室  

【醫療器械注冊證書編號】

國食藥監械（進）字2010第3401650號